影响抗原抗体反应的因素有两方面:
一、反应物自身的因素
1.抗体:
不同来源的抗体,反应性各有差异,抗体的浓度、特异性和亲和力都影响抗体抗原反应,为提高试验的可靠性,应选择高特异性、高亲和力的抗体作诊断试剂.等价带的宽窄也影响抗原抗体复合物的形成,单克隆抗体不适用于沉淀反应。
2.抗原:
抗原的理化性状、分子量、抗原决定簇的种类及数目均可影响反应结果.颗粒性抗原出现凝集反应,可溶性抗原出现沉淀反应,单价抗原与相应抗体结合不出现沉淀现象。
二、反应环境条件
1.电解质:
抗原和抗体通常为蛋白质分子,等电点分别为pH 3~5和pH 5~6,在中性或:弱碱性的环境中,表面均带负电荷,适当浓度的电解质会使他们失去一部分负电荷而相互结合,出现肉眼可见的凝集或沉淀现象:在抗原抗体反应中,常用0.85%的NaCI溶液或各种缓冲液作为抗原、抗体的稀释液,以提供适当浓度的电解质。
2、温度:
抗原抗体反应必须在适宜的温度中进行,一般为15~40℃,通常*适为37℃。一定范围内,温度升高,可促进抗原抗体分子问的碰撞机会,加速抗原抗体复合物的形成,加快可见反应的速度,若温度高于56℃,可导致已结合的抗原抗体再解离,甚至变性或破坏;温度越低,结合速度越慢,但结合牢固,易于观察。某些特殊的抗原抗体反应,对反应温度有特殊要求,如冷凝集素在4℃左右与红细胞结合*,20℃以上反而解离。
3、酸碱度:
抗原抗体反应必须在合适的酸碱度环境中进行,pH过高或过低都将影响抗原:抗体的理化性质,抗原抗体反应的*适酸碱度为pH 6~8。此外,当pH达到或接近颗粒性抗原的等电点时,即使没有相应抗体存在时,也会引起抗原非特异性凝集,即自凝,造成假阳性反应,严重影响试验的可靠性。