大鼠ELISA检测试剂盒试验操作注意事项

发布时间:2023-05-24

 大鼠ELISA检测试剂盒试验操作注意事项:

1加样:

①实验样本过多时,可分批次操作,以减少实验时间延长造成的误差;

②加酶试剂后,用吸水纸吸干孔外试剂;

③作定量试验时,使用加样器加注试剂,并经常校正其准确性,此外,要做到一份样本一个移液头,防止交叉污染。

2.温育:

①如有两种温度,尽量使用较低的温育温度、较长反应时间的条件;

②用1个小温度计放置在板孔反应液中测量观察;

③96孔板周围孔与中心孔在温育中的热力学梯度会造成“边缘效应”,因此尽量采用水浴;

3.洗板:

①手工洗板时,拍板时要垂直,避免交叉污染,用力不能过猛,防止抗原抗体复合物脱离;

②洗板机洗板时应经常检查冲洗头是否通畅,若被杂物堵塞时可用注射器针头挑出;

③为了洗涤效果好,实验室可采用机器与人工洗涤相结合的方法,在机器洗涤后再进行人工洗板1-2次,或适当增加洗板的次数;

4.显色:

ELISA试剂盒中,如以四甲基联苯胺(TMB)为底物,则提供的底物为A和B两瓶应用液;如以邻苯二胺(OPD)为底物,则试剂盒提供邻苯二胺片剂或粉剂。显色反应条件为37℃或室温反应15-30 min。以邻苯二胺(OPD)为底物的试剂,要临用前30 min配制且必须避光。以四甲基联苯胺(TMB)为底物的试剂则不需避光,但A、B液应尽量避免接触金属器械。

5.判定:

读取结果要在15-30 min内完成,定性测定用肉眼判读试验结果时,反应板应水平距离白色背景10-15 cm;定量测定时用酶标仪读取结果,酶标仪不应置于阳光或强光照射下,需先预热15-30 min再进行测试。

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