人血管内皮生长因子A(VEGFA)ELISA试剂盒文献支持

【文献标题】Downregulation of UBB potentiates SP1/VEGFA-dependent angiogenesis in clear cell renal cell carcinoma 【出版期刊】《oncogene》

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检测原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被血管内皮生长因子A（VEGF-A）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成ZZ的黄色。颜色的深浅和样品中的血管内皮生长因子A（VEGF-A）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

自备物品

1. 酶标仪（450nm）

2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

4. ‌定量分析‌
   通过双抗体夹心ELISA法实现VEGF-A浓度的JZ定量，检测灵敏度达到微量级（pg/mL水平）
   

5. 洗板方法

   1.   手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。

   2.   自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

      操作步骤

   3.   从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

   4.   设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

   5.   样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。

   6.   除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

   7.   弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

   8.   每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

   9.   每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。