仪器使用过程或多或少会出现问题,以下为个人结的部分保养过程,如有各位有遇到其他的问题也可以拨打我的电话:江华勇 (微信同号)
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1 使用前 1.1 保持贮液瓶清洁,对贮液瓶应定期清洁;用试剂瓶作贮液瓶时,要经常更换。 1.2 定期(如半个月)在稀硝酸溶液中超声、清洁过滤器,保持过滤器畅通无阻。 1.3 使用HPLC试剂和新蒸二次蒸馏水作流动相,所使用的溶剂其截止波长一定要低于检测波长,对不是HPLC级的试剂要进行过滤(HPLC试剂出厂前已用0.02µm滤膜过滤)。对流动相一定要脱气。 1.4 每天开始使用仪器,注意放空排气,确保泵头、流动池以及其它流路系统中无气泡存在。 1.5 保持仪器使用环境20℃-30℃,湿度30%-70%。 2 使用中 2.1 珍惜保护色谱柱,避免柱头突然产生大的波动,扰动损伤柱床。如避免泵启动过速、升压过快、样品阀搬动过慢所造成的柱压力的波动。 2.2 采用保护(警戒)柱,延长柱寿命。如污染物堆积于保护柱柱头,造成柱压升高,柱效下降,峰型变差时,卸下用强溶剂反冲后再用或更换新保护柱。 2.3 避免负荷进样,对250*4.6mm的柱子,进样量应不过100µg。在灵敏度允许的前提下,应尽量将试样浓度降低,减少进样量(进样体积可保持不变),这是保持HPLC柱性能持久良好的重要举措。 2.4 经常用强溶剂冲洗柱子,将柱内强保留组分及时洗脱出。反相柱用异丙醇-二氯甲烷(1:1)冲洗,正相(硅胶柱)用纯甲醇或异丙醇冲洗,时间均不少于1h。
2.5 以硅胶为基质的柱子,如C-18、C-8等,要控制好流动相的pH值,一般不要低于2.5,不高于7.0。 2.6 尽量用流动相溶解样品,一是避免出现拖尾峰、怪峰,二是避免试样在系统中由于溶解度降低而析出。 2.7 对于阻塞或受伤严重的柱子,必要时,可卸下不锈钢滤板,超声洗去滤板阻塞物,对塌陷污染的柱床进行清除、填充、修补工作,此举可使柱效恢复到一定程度(80%),有继续使用的价值。 2.8 色谱仪检测器输出和积分仪(处理机)要匹配,要合理设置参数如斜率、半峰宽、阈值、AUFS值、衰减等。将适宜的进样量和合适的参数结合起来,使主峰峰高达到记录仪满量程的80%左右。 2.9 如仪器突发故障,应立即停机并报告,由人员排除故障后经校准方可重新使用。 3 使用后 3.1 做完实验,及时用适当溶剂冲洗柱子和进样阀,尤其是对过夜的柱子和进样阀,一定要用足量的水洗净其中的盐类、缓冲液,再用甲醇或乙腈冲洗,并保存在乙腈中。正相柱保存在非极性有机溶剂(如己烷)中。 3.2 仪器关闭后应切断电源。 3.3 经常检查仪器的通风过滤装置,如有必要应清洗或更换。 3.4 对易耗品(如氘灯、过滤器、保持柱、柱塞杆密封圈等)要按规定时间更换。 3.5 保持仪器清洁。