Ultron ES-OVM色谱柱使用注意事项

发布时间:2018-01-22

 

Ultron ES-OVM是一款用于分离手性异构体(对映异构体)的手性柱。手性异构体虽有相同的化学结构,但是不能相互叠加,也不能被传统的HPLC色谱柱分离。ULtron ES-OVM柱包含的填料有很多的手性识别位点,使得该柱子可以分离很大范围内的对映体化合物。这款柱子识别氢键、极性、离子和疏水点,以及样品分子的三维结构。

Ultron ES-OVM填料是硅胶基体,粒径5um,孔径为120À,一种手性识别蛋白—卵粘蛋白通过化学键合在硅胶表面。

 

注意事项

 

操作指南

 

流动相影响因素

 

 

盐浓度

流动相中盐浓度对峰值保留的影响通过图2显示出来。由图可见,在高于20mM时没有影响。但当使用盐浓度低时(例如,5mM),酸性化合物的k&经常是增加的,然而碱性化合物的k&有轻微的减少。

 

 

 

 

pH

图1中显示了流动相pH和溶质容量因子k&之间的一种特定联系。碱性化合物的k&将会随着pH值升高而增加,而酸性化合物的k&将会随着pH值升高而减少。当pH低于3.9的时候酸性化合物也会减少保留时间,此点是卵粘类蛋白等电点。碱性化合物的分辨率随pH增加而增加。对于酸性化合物,分辨率随pH的减少而增加。

图1

 

图2

 

有机溶剂

通过改变流动相中过的有机溶剂(如,甲醇、乙醇或乙腈)种类会使得样品化合物的保留时间发生改变,浓度相同时只改变有机溶剂种类也会使得样品化合物的保留时间发生改变。这种影响和采用传统的反相HPLC的相类似,见图3.

 

图3

 

其它影响

柱温

柱温和峰保留时间之间的关联是复杂的。当柱效随着温度升高增加时,两个相近洗脱峰的佳分辨率可能出现在中间温度的某一个点。

样品载量

柱效随着注射样品量的增加而降低。因此,建议每个注射中都是一个低的样品上载(例如,少于5ug)。

应用

Ultron ES-OVM柱可以分离很多种类的手性异构体。其中包括药物方面例如β阻断剂烯丙心安和布尼洛尔,抗组织胺(氯曲米通),非甾体抗炎药(布洛芬)。其它应用包括农用化学品和外消旋胺以及酸性化合物。

 

柱子护理

Ultron ES-OVM柱可以安全的采用缓冲流动相pH范围在2~7.5(好是3~7)和常见的有机水混融溶剂(例如:乙腈,甲醇,乙醇和丙醇)。建议有机溶剂流动相不能>50%。为了保护分析柱不受污染,建议大多数应用下都采用保护柱。尽量避免样品中含有的可能在柱子上有很高保留的外来物质。柱子污染后会产生很差的峰形,有时候采用20~40柱体积的50%的乙腈/蒸馏水进行冲洗恢复。当很长时间不使用柱子的时候,必须将使用过的缓冲物质冲洗干净,柱子好保存在流动相为10%~20%的乙腈/蒸馏水中。

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