96T人分泌型免疫球蛋白AELISA 检测试剂盒

发布时间:2012-12-12

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人分泌型免疫球蛋白AELISA 检测试剂盒 

试验原理:
   sIgA试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知sIgA浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将sIgA和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中sIgA的浓度呈比例关系。

自备材料:

蒸馏水。
加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
振荡器及磁力搅拌器等。

样品收集、处理及保存方法:

血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

 

人分泌型免疫球蛋白AELISA 检测试剂盒  

 

操作注意事项:

试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

安全性:

避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

 

人分泌型免疫球蛋白AELISA 检测试剂盒  

 

试剂盒性能:

1. 灵敏度:小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性:不与其它细胞因子反应。
3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%。

  
操作步骤:

使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育45分钟。
甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育5分钟。避免光照。
取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
在450nm波长处测定各孔的OD值。

 

人分泌型免疫球蛋白AELISA 检测试剂盒 

结 果 判 断 与 分 析:

1、仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的sIgA标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的sIgA含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度 再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
3、检测值范围:0-40umol/L
4、敏感度: 0.1 umol/L

Dithizone 铅试剂 [60-10-6] 50g
DNA Native E.coli / 10mg
35-Dihydroxytoluene monohydrate 35-二羟基甲苯一水 [6153-39-5] 5g
35-Diiodo-L-tyrosine dihydrate 35-二碘-L-酪氨酸二水物 [18835-59-1] 25g
Diisooctylamine 二异辛胺 [106-20-7] 100ml
NN′-Diisopropylcarbodiimide (DIC) NN&-二异丙基碳酰亚胺 [693-13-0] 100g
Diisopropyl ether 异丙醚 [108-20-3] 250ml
NN-Diisopropylethylamine (Hünig’s ’ N-Ethyldiisopropylamine DIPEA) N,N-二异丙基乙胺(N-乙基二异丙胺) [7087-68-5] 500ml
 

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