用途：
血管内皮抑素(endostatin)是一种由约184 个氨基酸组成的多肽，这种天然蛋白质是胶原XVIII上的分子量为20KD的C端片段。其在1997年从血管内皮细胞瘤（Hemangio-endothelioma）细胞中被分离出来，发现对Lewis肺癌等一系列肿瘤有明显的抑制作用。肿瘤增长时必须形成新生血管，癌细胞从其中不断摄取营养物质与氧，运走代谢产物，从而满足肿瘤细胞生长的需要。抑制血管内皮细胞生成，从而阻断和破坏肿瘤组织中新的血管系统生成，使肿瘤生长减缓或停止。但随着肿瘤组织的增殖，内抑素水平会不断降低，约为正常人的10％，肿瘤周围的新生血管就会迅速扩张。因此，向癌症患者体内补充"外源性"内抑素，提高机体内抑素水平，就可以有效抑制肿瘤周围新生血管生成，切断为肿瘤提供养分的血液供应，让肿瘤"活活饿死"，从而治疗恶性肿瘤和有效防止手术后肿瘤扩散转移。内皮细胞抑制素通过抑制新生血管形成来抑制肿瘤生长的，而成年动物和人的正常组织的生长不依赖于新生血管的生成，所以内皮细胞抑制素对正常组织没有副作用。而且由于其不直接作用于肿瘤细胞，因而不产生抗药性。1999年末，美国对Endostatin的进行了首次临床试验。对endostatin的研究已经成为一个热点，其研究和应用范围也正在不断得到扩展和深入。
本试剂盒用于定量测定人血清或血浆中的内皮抑素浓度。
试剂盒组成：
酶标板(Coated Wells) 96wells Anti-Endostatin Biotin 22ml
样品稀释液 50ml 标准品(Standards) 1 set
TMB显色液 11ml HRP 22ml
终止液(Stop Solution) 10ml 浓缩洗涤液(20x) 25ml
标准品已经1：100 稀释。
需要但未提供的材料
1. 可在450nm处进行读数的酶标2. 仪；
3. 能吸取10 和200µL的移液器；
4. 可调多道（8）移液器（50－5. 200µL）；
6. 供可调多道移液器使用的试剂存放槽；
7. 洗瓶或洗板机；
8. 蒸馏水或去离子水；
9. 1升的圆柱形量筒；
10. 血清移液器：1和（10或25 mL）；
11. 移液器枪头；
12. 纸巾；
13. 计时器，14. 用以监控温育步骤；
15. 处理池和消毒剂（例如：0.5% 次氯酸钠 10% 家用漂白水）；
注意事项:
严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入HRP或底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。
底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
在储存和温育时避免强光直接照射。
平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
不能使用过期产品。
如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。
保存：
贮藏于2-8°C。
样品：
在此检测中，可使用人血清或血浆样品。
准备工作：
样品稀释100倍(5ul血清或血浆加500ul样品稀释液)标准品不稀释。
浓缩洗涤液(20X)用双蒸水稀释成1X(至500ml)。
操作步骤：
试剂盒应平衡至室温（20-25°C ）再试验。
取出所需反应板。
分别加入5ul标准品(Standards)、5ul已稀释血清或血浆于反应板孔中，轻轻混匀10秒。
每孔加入200ul Biotin anti Endostatin，轻轻混匀30秒。37°C温育30分钟。
洗板：甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板，并去除水滴（在厚叠吸水纸上拍干）；这样反复洗涤5次。
每孔加入200ul HRP轻轻混匀10秒。37°C温育30分钟。
洗板：甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板，并去除水滴（在厚叠吸水纸上拍干）；这样反复洗涤5次。
每孔加入100ul TMB显色液，轻轻混匀10秒钟，置暗处室温温育20分钟。
每孔加入100ul终止液（Stop Solution）。轻轻混匀30秒；15分钟内在450nm处读OD值。
以OD值为纵坐标，以标准品浓度为横坐标，绘制标准曲线。根据血清或血浆样品的OD值可在标准曲线上查出其浓度。（曲线适用：y=ax2+bx+c）
标本的浓度= 标准曲线上查出的浓度
