补体结合反应 -上海工硕生物技术有限公司

[ 原理 ] 抗原与抗体结合形成的复合物能激活补体，若抗原是绵羊红细胞，那么补体被激活后，使绵羊红细胞溶解，出现溶血现象。补体结合实验是一种有补体参与，并以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统的抗原抗体反应。参与本反应的五种成分可分为两个系统，一为待检系统，即为已知抗原（或抗体）和待检抗体（或抗原）另一个为指示系统，即绵羊红细胞和其相应的溶血素。待检抗原，抗体和先加入的补体作用后，再加入指示系统。若待检系统中的抗原 - 抗体相对应，两者特异性结合后激活补体，再加入的指示系统无补体结合，不出现溶血，是为补体结合实验阳性；若待检系统中的抗原与抗体不对应或缺少一方，补体不被激活，当指示系统加入后，绵羊红细胞 - 溶血素复合物激活补体，产生溶血现象，是为补体结合实验阴性。

本实验敏感性，特异性均较高，可用于检测某些病毒病，立克次体病，梅毒病等。由于参与反应的各成分之间要求有适当的量的关系，因此，做本实验之前必须通过一系列预备实验来确定补体，溶血素，抗原或抗体的使用量。

[ 方法 ]

一）溶血素单位滴定

1 材料：溶血素血清，抗原， 2% 绵羊红细胞悬液，补体（1:30 取豚鼠新鲜血清），生理盐水，小试管，吸管37 ℃水浴箱。

2 实验过程

1 ）按表分别加入各种不同稀释的溶血素 0.2ml 及其他成分。

2 ）充分混匀后置于 37 ℃水浴箱中 30 分钟，然后观察结果。

3 ）能呈现完全溶血的高稀释度的溶血素为 1 个单位

4 ）配制 2 个单位的溶血素溶液。

例如下表的结果表明，第11管（1:9600 倍稀释）中0.2ml溶血素为1个单位。实验室常用0.2ml中含2个溶血单位的稀释液，即1:4800配制时可以取 1:100 倍稀释的溶血素1ml 加生理盐水47ml 。

例：溶血素的滴定表 :

试管号	溶血素 0.2ml 稀释度	补体 (1:30)	生理盐水	2% 绵羊红细胞		结果
1	1 ： 1000	0.2	0.4	0.2	37 ℃ 致敏血球水浴 30 分钟	完全溶血
2	1 ： 1200	0.2	0.4	0.2		完全溶血
3	1 ： 1600	0.2	0.4	0.2		完全溶血
4	1 ： 2000	0.2	0.4	0.2		完全溶血
5	1 ： 2400	0.2	0.4	0.2		完全溶血
6	1 ： 3200	0.2	0.4	0.2		完全溶血
7	1 ： 4000	0.2	0.4	0.2		完全溶血
8	1 ： 4800	0.2	0.4	0.2		完全溶血
9	1 ： 6400	0.2	0.4	0.2		完全溶血
10	1 ： 8000	0.2	0.4	0.2		完全溶血
11	1 ： 9600	0.2	0.4	0.2		完全溶血
12	1 ： 12800	0.2	0.4	0.2		完全溶血
13	1 ： 16000	0.2	0.4	0.2		完全溶血
对照	—	0.2	0.4	0.2		完全溶血

二）补体单位滴定

1 材料

1）补体 1:30 稀释。

2）抗体2单位溶血素

3）抗原2%绵羊红细胞

4）生理盐水小试管，吸管37℃水浴箱

2 方法

1）依下表加入1:30 稀释的补体。

2）依次加入其他各成分至每管中37℃水浴后观察结果

3）补体单位的确定凡能使一定量红细胞发生完全溶解的小补体量，称为1个确定单位。如下表中自第3管可出现完全溶血现象，因此第3管 0.1ml）所含补体为1个确定单位。

由于在实际应用时补体有一部分损失，故需酌量增加一些，通常取其次高的一管补体量称为1个使用单位。在下例中：

1 个确定单位 =0.1ml 1:30 稀释的补体。

1 个使用单位 =0.12ml1:30 稀释的补体。

4 ）补体的稀释若使每 0.2ml 补体含 2 个使用单位，可照下式计算： 30 :（2 × 0.12 ） = x : 0.2

0.2 × 30

X= =25

0.24

即将补体稀释25倍，取0.2ml即可。

试管号	补体（ 1 ： 30 ）	生理盐水	37 ℃水浴 45分钟	溶血素 (2 单位 )	2% 羊红细胞悬液	37 ℃水浴 15 ~ 30 分钟	结果
1	0.06	0.54		0.2	0.2		不溶血
2	0.08	0.52		0.2	0.2		不溶血
3	0.10	0.50		0.2	0.2		不溶血
4	0.12	0.48		0.2	0.2		不溶血
5	0.14	0.46		0.2	0.2		不溶血
6	0.16	0.42		0.2	0.2		不溶血
7	0.18	0.40		0.2	0.2		不溶血
8	—	0.60		0.2	0.2		不溶血

三）正式实验

正式实验可以做定量的，也可以做定性的。本实验用伤寒杆菌的提取液为抗原，与其免疫血清做定性实验。

1 材料

1）补体 1:25 稀释

2）抗体 1:5 稀释的伤寒血清

3）抗原 1:50 稀释的伤寒抗原1:50 稀释的痢疾抗原

4）指示系统2单位溶血素2% 绵羊红细胞。

5 ）其他同预备实验

2 方法

按下表顺序操作:

试管号	伤寒血清	伤寒抗原	痢疾抗原	补体	生理盐水	37 ℃ 水浴 45 分钟	溶血系统	混匀后 3 ℃水浴 30分钟	结果
1	0.2	0.2	—	0.2	—				实验管
2	0.2	—	0.2	0.2	—				特异性对照
3	0.2	—	—	0.2	0.2				血清对照
4	—	0.2	—	0.2	0.2				抗原对照
5	—	—	—	0.2	0.4				补体对照
6	—	—	—	—	0.6				溶血素对照

3 结果

观察各管溶血情况，记录并分析其意义。

4 注意事项

1 ）以细菌做抗原时，应使用细菌的提取液而不是悬液，通过滴定找出合适的稀释度

2 ）所用试管，微量板，吸管等器材必须清洁无脂，各试剂无菌，以防止抗补体现象。

3 ）除了免疫球蛋白外，本实验中的其他成分均需要滴定。

补体结合反应

发布时间：2012-02-02

X= =25