RNase常见的污染源及其控制方法

自然界中许多生物会分泌RNase

RNase是生物体的“保护伞”，可防止外源RNA入侵。如：生物眼泪、唾液、汗液等体液中均会分泌RNase。

环境中的RNase稳定性非常好

环境中存在的RNase主要是由微生物（细菌和真菌）所分泌，由一种微小紧凑的蛋白组成。它的结构中具有二硫键，因此具有稳定性极强的天然属性，极难灭活，热变性后也可以很快恢复构象。并且，RNase耐热、耐酸、耐碱，因此，它对众多去污方法均具有抵抗作用。

检测RNase污染的小Tips

由于RNase污染而导致实验失败，如何有效检测RNase污染源，是令实验人员头疼的事情。建议从以下几点进行排查：

检测缓冲体系、溶液：可启用全新批次的RNase-free试剂测试比对，也可检测疑似污染溶液中的RNase。

检测RNA样品：RNase进入RNA样本可在多种情况下发生，如RNA分离时（少量RNase在RNA制备过程中引入），或日常取用时（会不可避免地需要重复开关样品管并插入可能被污染的加样枪头）。

可用GAPDH、cyclophilin、或beta-actin等管家基因的探针，通过northern分析来评估poly(A)RNA样品的完整性。

从源头开始，避免RNase的污染

RNase的无处不在，使得实验过程中，难以保存RNA样本的完整性。因此，可以从源头入手，一方面要严格控制外源性RNase的污染，另一方面要*限度地抑制内源性的RNase。

常见的污染源及其控制方法：

外源性

外源性污染源：

体液、水与缓冲液等溶液，枪头，离心管。

控制外源性RNase污染的方法：

操作人员全副武装

在实验过程中戴手套可避免源自人手的RNase污染；触摸皮肤、门把手及普通物体表面后更换手套；

使用*仪器与试剂

RNA操作的移液枪；使用RNase-free的枪头和离心管；使用RNase-free的化合物与试剂；

选择实验操作环境

远离/遮蔽通风孔或开放窗口，走动较少的区域作为RNase-free区域；

其他注意的点

在RNA提取和分析期间，不要进行其他可能引起RNase污染的实验。

内源性

内源性污染源：

所有组织样品均含有内源性RNase。

抑制内源性RNase活性的方法：

样本保存

组织取样后若不直接提取RNA，要及时用液氮迅速冷冻存于-80°C环境，并尽早进行实验，这样可使RNA的降解达到*少。

添加抑制剂

在细胞裂解液中加入RNase抑制剂（RNaseinhibitor），使破碎细胞与灭活RNase同步进行，*限度地降低细胞破碎过程中所释放的RNase的活性。

RNase抑制剂可有效避免RNase污染

RNasin能够保护mRNA的完整，有利于提高转录及翻译的效率，同时避免了使用有机化合物抑制剂可能带来的影响。

RNasin是从人胎盘或大鼠肝中提取的一种特异的酸性糖蛋白。其分子量为51kDa，等电点pH值为4.7。RNasin对RNaseA、RNaseB或RNaseC抑制能力极强，可快速特异地与它们以非共价键结合形成1:1的复合物，从而抑制RNase的活性，防止RNA被其降解。但需注意，RNasin不能抑制RNaseI、T1、T2、H、U1、U2和CL3的酶活性。

目前，RNasin主要用于cDNA合成，体外转录，体外翻译，以及mRNA-protein复合物分离纯化等过程中保护RNA不被降解；还可用于特定RNase活性的鉴定等。