ELISA原理及常用方法

1971年瑞典学者Engvail和Perlmann,荷兰学者VanWeerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫吸附测定法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay, ELISA)。

酶联免疫吸附（ELISA）用于：

（1）免疫酶染色各种细胞内成份的定位；

（2）研究抗酶抗体的合成；

（3）显现微量的免疫沉淀反应；

（4）定量检测体液中抗原或抗体成份。

优点：快速、灵敏、定性、定量、定位

实验原理：

1.包被：抗原/抗体，固相化

2.反应： 1)待测抗体/抗原； 2)酶标抗原/抗体

3.洗涤：使结合在固相上的抗原抗体复合物与未结合的分离

4.底物显色：定性/定量分析

常用的酶与底物：

酶底物显色测定波长辣根过氧化物酶horseradish pero

xidase,HRP邻苯二胺（OPD）橘红色492nm四甲基联苯胺（TMB）黄色450nm碱性磷酸酶alkaline phosohatase,AP4-硝基酚磷酸盐(p-NPP)黄色405nm终止液：2mol/L H2SO4

常用方法：

1.间接法

检测抗体*常用的方法, 主要用于对病原体抗体的检测。

优势：二抗可以加强信号，而且有多种选择能做不同的测定分析。不加酶标记的一级抗体则能保留它*多的免疫反应性。

缺点：交互反应发生的机率较高

2.双抗体夹心法

检测大分子抗原*常用的方法。

优势：高灵敏、高专一性，抗原无须事先纯化。

缺点：抗原一定得拥有两个以上的抗体结合部位。

3.竞争法

检测小分子半抗原（药物、激素等）。

优势：可适用比较不纯的样本，而且数据再现性很高。

缺点：整体的敏感性和专一性都较差。