猪去甲肾上腺素(NE)ELISA试剂盒kit说明书

来源:上海润裕生物科技有限公司
发布时间:2021-05-19 08:55:38

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猪去甲肾上腺素(NE)ELISA试剂盒kit说明书

猪去甲肾上腺素(NE)ELISA试剂盒kit说明书实验准备:

试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

1. 标准品复溶:试剂盒提供6管标准品,每管已浓度,并且冻干。实验前在每个标准品管中加入0.5mL样本稀释液,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动助其溶解,使其恢复为每个标准品管身标注的浓度。

2. 20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按120稀释,即120×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。


猪去甲肾上腺素(NE)ELISA试剂盒kit说明书双抗体夹心法(检测未知抗原);
1
、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml4℃ *。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次。
2
、加样:加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)
3
、加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml37℃ 孵育0.51小时,洗涤。
4
、加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml37 1030分钟。
5
、终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml
6
、结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。


猪去甲肾上腺素(NE)ELISA试剂盒kit说明书操作步骤
1
、加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品*终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
2
、温育:用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。
3
、配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
4
、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此
重复5次,拍干。
5
、加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
6
、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
10
分钟.
7
、终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)
8
、测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

Elisa试剂盒性能:

1、准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900

2、灵敏度:检测浓度小于10 pg/ml

3、特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4、重复性:板内、板间变异系数均小于15%

贮藏:2-8℃,避光防潮保存。


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