MDCK细胞

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英文简称:MDCK细胞
产品名称:犬肾细胞；MDCKNBL-2
规格:T25
形态特性:上皮样细胞生长
生长特性:贴壁生长 
特征特性:1958年，Madin SH和Darby NB从表观正常的成年雌性科克猎犬的肾建立了MDCK细胞株。角蛋白阳性。该细胞曾被用于研究β淀粉前体蛋白的形成及其蛋白水解产物的分类。 
培养条件:DMEM+10%FBS

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养*。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

细胞培养的优点：

1.研究的对象是活细胞

在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。

2.研究条件可以人为控制

pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。

3.研究的样本可以达到比较均一性

通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。

4.研究内容便于观察、检测和记录

采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。

2CD1a 英文名称： T淋巴细胞CD1抗体 0.1ml
Phospho-CHK2 (ser19) 英文名称： 磷酸化细胞周期检测点激酶2抗体 0.1ml
Clathrin heavy chain 英文名称： 网格蛋白重链抗体 0.2ml
CD168 英文名称： 透明质酸介导细胞游走受体抗体 0.1ml
C2orf24 英文名称： 2号染色体开放阅读框24抗体 0.2ml
C2orf60 英文名称： 2号染色体开放阅读框60抗体 0.2ml
phospho-CDK7 (Thr170) 英文名称： 磷酸化周期素依赖性激酶7抗体 0.1ml
Phospho-CDK9 (Thr29) 英文名称： 磷酸化周期素依赖性激酶9抗体 0.1ml
phospho-CHEK1 (Ser280) 英文名称： 磷酸化细胞周期检测点激酶1抗体 0.1ml
phospho-CHEK1(Ser317) 英文名称： 磷酸化细胞周期检测点激酶1抗体 0.1ml
phospho-CDKN2A (Ser140) 英文名称： 磷酸化抑癌基因p16抗体 0.1ml
phospho-CDKN2A (Ser152) 英文名称： 磷酸化抑癌基因p16抗体 0.1ml
phospho-CDKN2A (Ser8) 英文名称： 磷酸化抑癌基因p16抗体 0.1ml
phospho-CREB-1(Ser129) 英文名称： 磷酸化CREB-1抗体 0.1ml
phospho-CSF2RB (Tyr766) 英文名称： 磷酸化粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子受体β抗体 0.1ml
phospho-CDH2 (Tyr820) 英文名称： 磷酸化N-钙粘附分子抗体 0.1ml
phospho-CDC27 (Thr244) 英文名称： 磷酸化后期促进复合蛋白3抗体 0.1ml
phospho-c-Abl(Tyr283) 英文名称： 磷酸化非受体酪氨酸激酶c-Abl抗体 0.1ml
phospho-c-Abl(Thr735) 英文名称： 磷酸化非受体酪氨酸激酶c-Abl抗体 0.1ml
MDCK细胞C9orf75 英文名称： 9号染色体开放阅读框75抗体 0.2ml
CD4 英文名称： CD4抗体 0.1ml
CD42b 英文名称： 血小板糖蛋白GPIb抗体 0.2ml
CARM1 英文名称： 蛋白精氨酸N甲基4抗体 0.1ml

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。