人ELISA试剂盒然后再加标本和酶标抗体进行竞争结合反应。竞争法测抗体有多种模式，可将标本和酶标抗体与固相抗原竞争结合，抗HBc 一般采用此法。另一种模式为将标本与抗原一起加入到固相抗体中进行竞争结合，洗涤后再加入酶标抗体，与结合在固相上的抗原反应。抗HBe的检测一般采用此法。
小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点，因此不能用双抗体夹心法进行测定，可以采用竞争法模式。其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合。标本中抗原量量愈多，结合在固相上的酶标抗原愈少，*的显色也愈浅。小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。做了十多次的ELISA，能够得到线性比较好的标准曲线，但是同样浓度的标准品每次的OD值都不一致，样品就更加惨不忍睹了，除了酶标板之外，其余封闭蛋白，抗体，抗体稀释度，等等条件都已经更换过，但是问题还是没能解决，怀疑是酶标板的问题。求教各位高手，有什么方法可以快速验证酶标板的可靠性。
人ELISA试剂盒本身灵敏性很高，每次做出来的值不一样很正常，特别是od值比较大的时候更是差别很大，但是只要不要偏差太大就好，一般偏差要求10%内吧，好的数据是3%内。首先要稳定所有的条件，不同的条件下做的板子读值不一样很正常。在同样条件下同批次的板子，如果测定不一样，就是包被问题或者保护剂的问题，但这两个都是各个试剂盒的机密，zui好看看文献里别人怎么做的。
其次每次实验的标曲上同一浓度样品的OD值不一样是很正常的，这与抗原抗体反应体系、作用时间、显色时间等等一系列的因素有关。鉴定该ELISA体系是否可靠，*关键的指标是加标回收率和稀释线性，如果你怀疑的话可以做一下。
