制备高效液相色谱的关键是色谱柱，所选用色谱柱的大小取决于待分离样品的量。可通过增加分析柱柱长或增加分析柱内径来增大样品的制备量。如图11.4所示。
Hope和Hoffmann根据先前的研究证明，给出被分离样品i的产率与柱截面积和长度之间有如下关系：
图11.4 柱体积增加
式（11.1）中，Pin为被分离样品i的产率，A为柱的截面积，εt为的孔率，u0为线流速，Ci为初始样品浓度，D为进样体积与它的体积偏差值之比，N为要求得到的塔板数，H0为理论塔板高度，L是柱长。
通过等式（11.1）可以推出：在分析分离的条件下，1/N= H0/L;L=L0(L0为分析柱长)，则括号内数值为零，产率为零（被分离样品量无限小）。
柱体积（Vcol）与柱长L、柱截面积A之间有如下关系：
通过以上理论计算说明，当两根制备柱体积相同而柱长度及内径不同时，在相同分离度下，在柱体积过载的条件时，得出在分析分离转向制备分离的过程中，当制备柱柱长比分析柱柱长长出50%时，增加分析柱柱长，制备产率的增加与增加分析柱柱内径制备产率的增加相等。若制备柱柱长是分析柱柱长的1.5倍以下时，增加色谱柱长，制备产率的增加要比增加内径引起制备产率增加快。
在制备色谱柱中，一般希望色谱柱有较大的选择性（α>1.2）和较小的容量因子。色谱柱的其它一些色谱参数（如填料粒径的大小）对制备分离也很重要，表（11.1）给出了制备柱、分析柱的规格及进样量等的比较。
表11.1 制备柱分析柱的尺寸和进样量
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柱型 柱内径 填料粒径 固定相用量 柱载 （mm） （um） （g） （mg） |
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分析 |
1－5 |
5－10 |
0.2－3 |
0.2－3 |
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分析－半制备 |
6－11 |
5－10 |
3－25 |
3－25 |
|
半制备 |
11－30 |
5－10 |
20－103 |
20－103 |
|
半制备－制备 |
20－102 |
10－20 |
100－104 |
100－104 |
|
工业 |
102－103 |
20－30 |
103－105 |
103－105 |
把分析柱上柱量按比例放大到制备柱，又不损失分离度，可按下示计算：
式中，dc,2为制备柱内径
L2为制备柱长度；
dc,1为分析柱内径；
L1为分析柱长度。
流动相流量的放大比例则为：
来源：一修网 www.yixiu-lab.com
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