HPLC法测定加味四逆颗粒中柴胡皂苷a的含量

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王丽娜¹ ，李云涛¹，长萍²

(1.哈药集团世一堂制药厂，黑龙江哈尔滨 150088；

2.哈尔滨绿行医药科技开发有限公司，黑龙江哈尔滨 150088)

[摘要] 目的：用HPLC法测定加味四逆颗粒中柴胡皂苷a的含量。方法：样品经甲醇超声提取，使用C₁₈ 色谱柱，乙腈-水(37:63)为流动相，检测波长208 nm，流速1 mL·min^-1，柱温:namespace prefix = st1 ns = "urn:schemas-microsoft-com:office:smarttags" />35℃ 。结果：柴胡皂苷a线性范围(0.2～1.6)µg，相关系数r=0．999 8，平均回收率99.9％。结论：样品处理方法合理，方法学考察符合定量要求，结果准确，可用于加味四逆颗粒中柴胡皂苷a的含量测定。

[关键词] 加味四逆颗粒；柴胡皂苷a；高效液相色谱法

[中图分类号] R284.1  [文献标识码] B  [文章编号] 1005-9903(2008)01-0011-02

 

加味四逆颗粒由柴胡、甘草、白芍、枳实等药味组成，具有疏肝解郁调畅气机等功效。为了控制产品质量，本文用HPLC法对本品中所含柴胡皂苷a进行了含量测定。

1 仪器与试药

Agilentl 100高效液相色谱仪，包括G1379A脱气机，G1311A四元泵，G1316A柱温箱，G1314A可变波长检测器，G1328B手动进样器及支架，G2170AA色谱工作站。

柴胡皂苷a对照品(生物制品所，110778-200301)，乙腈为色谱纯，水为蒸馏水，加味四逆颗粒(自制)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件Alltima-C₁₈ 柱(4.6 mm×250 mm，5μm)；乙腈-水(37:63)为流动相；检测波长为208 nm；流速1 mL·min^-1；柱温35℃ ；理论板数按柴胡皂苷a峰计不低于5 000。

2.2 对照品溶液的制备 取柴胡皂苷a对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含0.04 mg柴胡皂苷a的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品约1.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率250 W，频率45 KHz)30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，以0.45 m微孔滤膜滤过，即得。

2.4 测定方法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 L，注入高效液相色谱仪，如法测定。

2.5 线性关系的考察 精密称取柴胡皂苷a对照品10.06 mg，置10 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得标准品贮备液。精密吸取上述标准品贮备液2.50 mL置25 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，制成每1 mL含柴胡皂苷a 0.1 mg的溶液，再精密吸取上述0.1 mg·mL 的标准品溶液1，2，4，6，8 mL置10 mL量瓶中，加水稀释至刻度。摇匀，分别制成每1 mL含柴胡皂苷a 0.01，0.02，0.04，0.06，0.08 mg的溶液，分别精密吸取上述溶液各20 L，注入液相色谱仪，记录色谱图。以进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为Y= 7 190.246 38x+0.213 85(r=0.999 8)线性范围在(0.2～1.6) μg间呈良好的线性关系。

2.6 加样回收试验  精密称取6份样品(含量1.O1mg·g^-1 )，分别置具塞锥形瓶中，加入含量为0.751mg·mL 的柴胡皂苷a对照品溶液1 mL，加入甲醇49 mL，密塞，称定重量，超声处理30 min(功率250w，频率45 KHz)，滤过，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，以0.45 m微孔滤膜滤过，即得。分别精密吸取上述溶液各20L，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见表1。

2.7 精密度试验 吸取上述0．044 mg·mL^-1浓度的对照品溶液20 L注入液相色谱仪，重复进样6次，计算峰面积，RSD=1.0％ 。

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2.8 重复性试验  取同一批号的加味四逆颗粒，按2.3供试品溶液制备方法制备6份样品，色谱条件如上所述，计算RSD=0．3％，说明重复性较好。

2.9 稳定性试验取同一供试溶液，每隔2 h测定1次，结果表明在10 h稳定性良好。

2.10 样品测定  按上述方法测定3批样品中柴胡皂苷a的含量，测定结果分别为1.1，1.2，1.0。

3 讨论

检测波长的选择，柴胡皂苷a对照品溶液在(190～700)nm波长范围内，大吸收波长为208nm，故本试验选择208 nm作为检测波长。

流动相的确定，在上述色谱条件下，本试验选择了不同比例的流动相：乙腈．水(43:57)和乙腈．水(40:60)、乙腈．水(37:63)，结果表明乙腈．水(37:63)，分离效果好。

提取方法的选择，本试验分别采用了甲醇超声处理20 min、30 min及稀乙醇加热回流30 min 3种方法的比较试验，结果表明甲醇超声处理30 min的提取效果好。本方法可用于加味四逆颗粒中柴胡皂苷a的测定。

[参考文献]

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[2] 罗燕燕，张绍青，林明美．柴胡药材中皂苷a，d的HPLC测定[J]．药学杂志，1992，27(4)：215．

[3] 董友毅，罗思齐，潘胜利．柴胡主要皂甙成分的高效液相色谱测定[J]．中药杂志，1989，14(11)：678．

[4] 刘岱，杨立新，崔淑莲．高效液相色谱法测定柴胡冲剂中柴胡皂甙A的含量[J]．中药杂志，1998，23(2)：92．