摘要 目的：建立同时测定血浆中茶碱、苯巴比妥、苯妥英钠和卡马西平浓度的毛细管电泳法。方法：取血浆0.5mL，用醋酸乙酯提取后吹干，用40µL运行缓冲液溶解，进样于毛细管电泳仪进行分离测定。毛细管电泳条件：缓冲液为30 mmo1·L-1 磷酸氢二钠(pH=8.0)含75 mmol·L-1 十二烷基硫酸钠(SDS)，温度：:namespace prefix = st1 ns = "urn:schemas-microsoft-com:office:smarttags" />
关键词：毛细管电泳法；茶碱；苯巴比妥；苯妥英钠；卡马西平
茶碱、苯巴比妥、苯妥英钠和卡马西平都是治疗药物监测的主要药物，其血药浓度监测具有重要的临床意义已成为共识。目前在临床实践中，荧光偏振免疫法(FPIA)因其快速、简便而受到临床的欢迎，但成本昂贵，试剂盒效期短，不能同时测定多种药物。采用高效液相色谱法同时测定上述药物血药浓度已见报道[1-8]，但消耗有机溶剂多，仪器平衡较慢，不利于日常监测。本文采用毛细管电泳法(CE)同时测定上述4种药物的血药浓度，克服了上述不足，取得令人满意的结果。
1 仪器与试药
贝克曼P／ACE 5000毛细管电泳仪，空心熔融毛细管柱(河北永年光纤厂)。电热恒温水浴(上海华连医疗器械公司)，液体快速混合器(江西医疗器械厂)。对照品茶碱、苯巴比妥、苯妥英钠、卡马西平、巴比妥(内标)均来自药品生物制品所，醋酸乙酯、盐酸、磷酸氢二钠、十二烷基硫酸钠(SDS)均为分析纯。
2 电泳条件
毛细管柱长
3 样品处理与测定
取0.5 mL血浆于尖底试管中，加入内标
4 电泳图谱
在此电泳条件下，4种组分可在10 min内得到良好分离，且未见血浆中杂质干扰测定(图1)。
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5 标准曲线制备
取空白血浆0.5 mL，分别加入对照品溶液，使茶碱、苯巴比妥和苯妥英钠的浓度均为4，8，16，24，32，48 µg·mL-1，卡马西平的浓度为2，4，8，12，16，24 µg·mL-1，按“样品处理与测定”项下所述方法进行操作，以对照品峰的峰面积与内标峰的峰面积之比(Y)对对照品浓度(X，µg·mL-1 )进行线性回归，线性关系良好，茶碱、苯巴比妥、苯妥英钠、卡马西平回归方程分别为：
Y =0.0375 + 0.0481X r=0.9997
Y =0.0609 + 0.0715X r=0.9998
Y =0.0972 + 0.1574X r=0.9999
Y =-0.0325 + 0.1804X r=0.9990
本方法的低检测浓度为：茶碱、苯巴比妥和卡马西平都为0.2 µg· mL-1，苯妥英钠为0.1 µg·mL-1 (S／N=3)。
6 精密度试验
对茶碱、苯巴比妥和苯妥英钠的浓度均为8，24，48 µg·mL-1，卡马西平的浓度为4，12，
7 方法回收率试验
取空白血浆0.5 mL，分别加入对照品溶液，使茶碱、苯巴比妥和苯妥英钠的浓度均为16，32 µg·mL-1，卡马西平的浓度为8，16 µg·mL-1，按“样品处理与测定”项下所述方法进行操作，计算方法回收率，结果见表1。
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8 讨论
8.1 缓冲液的选择 本文考察了运行缓冲液中pH、SDS浓度和磷酸氢二钠浓度对分离的影响。在CZE模式下，卡马西平不出峰，pH为7.5及9.0时茶碱、苯妥英钠和苯巴比妥峰形较差，当pH为8.0时，它们的峰形较好，且相互分离。在pH 8.0的缓冲液中加入SDS，组分的迁移时间随SDS浓度的增加而增加，当SDS的浓度在50 mmol·L-1以下时，卡马西平的峰形不理想，当SDS浓度增加至75 mmol·L-1 时4种组分可完全分离，且峰形理想。另外，磷酸氢二钠浓度小于20 mmol·L时，血浆中的杂质峰干扰卡马西平出峰，浓度增加至30 mmol·L-1，分离良好。因此确定运行缓冲液为30 mmol·L-1 磷酸氢二钠(pH=8.0)含75mmol·L-1SDS。
8.2 柱温的影响 卡马西平的峰形受柱温影响较大，柱温增加可改善其峰形，根据实验选择柱温为
8.3 检测波长的选择 由于同时测定4种组分，其紫外大吸收波长不同，因此对紫外检测波长进行了选择。在波长分别为200，214，254，280 nm时，4种被测组分在200 nm处的紫外吸收强。
8.4 小结 本法可同时测定茶碱、苯巴比妥、苯妥英钠和卡马西平的血药浓度，简便、灵敏，且仪器平衡快，便于常规快速监测。另外，本法测定成本低，减轻患者的经济负担。
