气/质联用法测定氯霉素CAP残留

(1)试剂和材料 以下所用的试剂，特别注明外均为分析纯试剂；水为符合GB／T6682规定的二级水。:namespace prefix = o ns = "urn:schemas-microsoft-com:office:office" />

①氯霉素：含氯霉素不得少于99．o％

②丙酮：色谱纯

③甲醇：色谱纯

④乙酸乙酯：分析纯

⑤正己烷：分析纯

⑥4％氯化钠溶液：称取适量的氯化钠，配制成浓度为4％的氯化钠溶液

⑦硅烷化试剂：BSTFA+TMCS，99；l，lml／瓶

⑧氯霉素标准贮备液：称取氯霉素约50mg，105~(2干燥4h，精密称量，置于50ml棕色容量瓶中，加丙酮溶解并稀释至刻度，摇匀，配置成浓度为lmg／ml的贮备液，置:namespace prefix = st1 ns = "urn:schemas-microsoft-com:office:smarttags" />4℃冰箱中密封保存，有效期为3个月。

⑨氯霉素标准工作液：临用前，准确量取适量氯霉素标准贮备液，用丙酮稀释成适宜浓度的氯霉素标准工作液。

(2)仪器和设备

①高速组织捣碎机

②分析天平：感量0．00001g

③天平：感量0．01g

④均质器

⑤离心机

⑥氮吹仪

⑦恒温干燥箱

⑧回旋振荡器

⑨蜗旋式混匀器

⑩离心管：100ml

⑾具塞离心管：15ml，5ml

⑿气相色谱仪，配质谱检测器

(3)测定步骤

①提取和净化 称取5．08(iO．05g)试料，置于100ml离心管中，加入25ml乙酸乙酯，均质lmin，回旋振荡20min，3000r／Illin离心5min。取上清液转入另一100ml离心管中，试料中再加10ml乙酸乙酯，重复提取1次，合并上清液，氮气(55℃)吹干。加入lml甲醇超声溶解残渣，依次加入25ml 4％氯化钠和lOml正己烷，回旋振荡20min，静置分层，弃去正己烷层。再加入10ml正己烷，重复操作，弃去正已烷层。再加入15ml乙酸乙酯，回旋振荡20rain，静置分层，吸取上层转入15ml具塞离心管中，氮气(55℃)吹至约lml。

②衍生化 将浓缩液移人5ml具塞离心管中，用Iml乙酸乙酯洗原离心管，合并乙酸乙酯溶液，氮气(55℃)蒸发至干。向残余物中依次加入200~L正己烷，100／uL硅烷化试剂，混匀30s，于恒温干燥箱中80~C反应1h，氮气(55℃)吹干。加入o．50ml甲苯溶解，在涡旋式混合器上充分混匀，用气质联用仪选择离子监测方式检测。取适量的氯霉素标准工作溶液，同步衍生、检测。

③测定

a.气相色谱条件

色谱柱：DB—5MS，30m×0．25mm

进样口温度：250~C

进样方式：不分流

进样体积：2ul。

柱温程序：100℃保持lmin，30~C／rolm升温至280~C，10min

载气：氦气，纯度>99，995％，流速：lmi／mln(恒流)

b.质谱条件

离子源：负化学源

溶剂延迟：5min

传输线温度：250~C

离子源温度：200~C

反应气：甲烷，纯度>99．995％，1．0ml／min

选择离子监测(M／Z)：376，378，468，470

保留时间：8．9min左右

c．测定 样品峰与标样的保留时间之差不多于2s，至少检测到4个选择离子，即466、468、470、376，其中选择离子466是基峰；选择离子468的相对强度(与基峰的比例)不过标准相应选择离子相对强度平均值的120％；选择离子470的相对强度(与基峰的比例)不过标准相应选择离子相对强度平均值的~30％；选择离子376和离子378的相对强度(与基峰的比例)不过标准相应选择离子相对强度平均值的--50％。

选择离子监测(SIM)法计算面积，根据样品液中氯霉素含量的情况，选定峰面积相近的标准工作溶液，做单点或多点校准，以离子峰(m／z 466)的峰面积积分值定量。标准工作溶液和样品液中氯霉素衍生物的响应值均应在仪器检测的线性范围内。对标准工作液和样品液等体积参插进样测定。

④空白试验 除不加试样外，按上述测定步骤进行。

(4)计算 按下式计算供试样品中氯霉素的残留量(ug／kg)

X=ACsV/Asm

X--试样中氯霉素残留含量，bg／k8；

A--样液中氯霉素衍生物的峰面积；

As--标准工作液中氯霉素衍生物的峰面积

Cs--标准工作液中氯霉素的浓度，”8／ml；

V--样液终定容的体积，mi

m--所称取的试样量，g。

注：计算结果应扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留小数点后2位数字

(5)检测限和回收率

本方法的检测限为0．1ug／kg。

在0．10—10"8／ks添加浓度水平上，回收率范围为70％～110％。