放射免疫技术文章

发布时间:2011-12-05

放射免疫技术是利用放射性核素分析的高灵敏性、性与抗原抗体反应的高特异性相结合而创建的——类标记免疫技术。1959年YalOW和Berson利用放射性核素标记胰岛素并与传统的免疫反应相结合,创立了放射免疫分析(Radio immunoassay,RIA)。该项技术的创建和应用,为生物医学痕量物质分析开创了一个崭新的领域,极大地提高了临床实验医学的诊断水平。同时,依据放射免疫技术的基本原理衍生出的酶联免疫、荧光免疫及发光免疫等众多标记免疫技术,已成为生物活性物质微量测定的重要分析技术体系。

 

    早期的放射免疫技术是基于竞争性结合反应原理的放射免疫分析(RIA),稍后又发展了非竞争性结合的免疫放射分析(immunoradiometric assay,IRMA)。这类技术具有灵敏度高(可测定10-9~10-15g/L水平的微量物质)、特异性强、重复性好、样品及试剂用量少、操作简便且易于标准化等优点,广泛应用于生物医学研究和临床诊断领域中各种微量蛋白质、激素、小分子药物和肿瘤标记物的定量分析,对相关学科的发展起到了极大地推动作用。

 

    一、基本类型及原理

    放射免疫技术按其方法学原理主要有两种基本类型:

    1.放射免疫分析(RIA)  是以放射性核素标记的抗原与反应系统中未标记抗原竞争结合特异性抗体为基本原理来测定待检样品中抗原量的一种分析法。

    2.免疫放射分析(1RMA)  是用放射性核素标记的过量抗体与待测抗原直接结合,采用固相免疫吸附载体分离结合与游离标记抗体的非竞争放射免疫分析法。

广义放射免疫技术还应包括使用受体测量抗原的放射受体分析(radioreceptorassay,RRA)和用标记配体研究受体生物学特性的放射配体结合分析(radioligandbinding assay,RBA)。

 

    二、常用的放射性核素

    放射免疫技术常用的放射性核素有125I、131I、3H和14C等。其中3H和14C在衰变时产生的β射线能量弱易防护,但核素半衰期长,标记物的有效期长,标记时需用的实验设备条件要求较复杂,且β射线测定时需用液体闪烁技术,不易在一般实验室进行,加之放射性废物处理困难,因此应用受限。使用广泛的是125I,其优点为:①125I的化学性质较活泼,容易用较简便的方法制备标记物;②其衰变过程不产生电离辐射强的吕射线,对标记多肽,蛋白抗原分子的免疫活性影响小;③125I释放的丁射线测量方法简便,易于推广应用;④125I的半衰期(60天)、核素丰度(>95%)及计数率较131I (核素丰度20%,半衰期8天)更为适用。

 

    三、标记物制备及鉴定

    放射性标记物的质量优劣,将直接影响分析测定结果。制备高比活度、高纯度和具完整免疫活性的标记物是建立高质量放射免疫分析法的重要条件。

采用放射性碘(如125I)制备标记物的基本原理是以放射性碘原子通过取代反应置换被标记物分子中酪氨酸或酪胺残基以及组胺残基上的氢原子。因此,凡蛋白质、肽类等化合物在结构中含有上述基团者,均可用125I直接标记,而对那些不含上述基团的甾体激素或药物分子,则必须在分子结构上连接相应基团才能用于放射性碘标记。

用于被标记的化合物一般要求其纯度应大于90%,以免影响标记物反应的特异性;而且应具完整的免疫活性,否则会造成测定灵敏度下降;此外对于需在化合物分子中连接酪氨酸甲酪或组胺、酪胺等基团时,应注意引入的分子结构不会掩盖抗原决定簇。

上一篇:抗体制备的新技术
下一篇:如何对微生物菌种进行活化