体外培养细胞的染色体标本制备
1) 体外培养的细胞,在倒置镜下观察到有较多的分裂细胞(传代后24h,圆形发亮的细胞)时,加入秋水仙素溶液,终浓度为0.3μg/ml培养液;
2) 继续培养3h;
3) 胰酶消化收集细胞至离心管;
4) 离心1000转/min,离心10min,去上清;
5) Hanks液洗,离心,去上清;
6) 低渗处理:加入0.075mol/L KCl溶液8ml,置37℃恒温水浴中30min,用吸管稍吹打(同上);
7) 固定及制片如外周血染色体的制备。
1. 秋水仙素处理时间过长,分裂细胞多,染色体短小;反之,则少而细长故秋水仙素的浓度及时间要准确掌握。
2. 固定液应在使用前临时配制。
3. 载玻片一定要洁净,否则染色体分散不好。
4. 染色体分裂指数低:患者处于非常时期(放、化疗期);培养基营养成分不良;培养基pH偏低或偏高;PHA过量或不足;小牛血清质量不高;培养箱温度偏低;秋水仙素处理时间过短。
5. 接种的血样愈新鲜愈好。
6. 培养过程中,如发现血样凝集,可将培养瓶轻轻振荡,使凝块散开,继续放回37℃恒温箱内培养。