甘草为豆科植物甘草属乌拉尔甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch．)、胀果甘草(G．inflata Bata1．)、光果甘草(G．glabra L．)的干燥根及根茎H J，具有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药之功效。甘草中黄酮类成分具有多种生物活性，除了消炎、抗菌、抗变态等作用外，在抗氧化、抗癌、防癌、防肿瘤等也有明显的作用 ]。现代药理研究表明甘草苷、异甘草苷为甘草黄酮类的主要有效成分。本实验研究甘草中同时制备甘草苷、异甘草苷这两个黄酮类成分的工艺，同时对其进行结构鉴定和纯度检查，其含量大于98％ ，达到了定性和定量用对照品的要求，可作为甘草药材及其制剂质量控制的对照品.
1 仪器与材料
Agi!entl100型液相色谱仪，二极管阵列检测器，ARX．300核磁共振光谱仪(TMS内标，瑞士 Bruker公司)，日本YanacoMP—s3熔点测定仪(未校正，广州实技科学仪器有限公司)，ZF-I型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)，A B-8大孔树脂(天津农药厂)，聚酰胺和聚酰胺薄膜(浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂)，Sephadex LH-20(Pharmacia公司)，乙腈和甲醇(色谱纯，天津市康科德科技有限公司)，水为纯水，其他试剂均为分析纯。
甘草药材购于樟树中药材市场，由江西中医学杨世林教授鉴定为胀果甘草G．inflata Bata1．的根。
2 方法与结果
2．1 制备工艺
甘草5 kg，加70％ 的乙醇回流提取2次，每， 1．5 h，滤过，合并滤液，回收乙醇得浸膏800 g。、膏经大孔树脂AB．8柱层析，用乙醇-水系统梯度，脱，分别收集50％ 和70％ 的乙醇溶液洗脱部 70％ 的乙醇溶液部分经聚酰胺柱层析，乙醇一水统梯度洗脱，收集50％ 的乙醇溶液洗脱部分，凝J 柱层析分离，得到黄色晶体(50 mg)。50％ 的乙i 溶液洗脱部分经制备液相制备，得白色晶体(1： mg)。
2．2 结构鉴定
2．2．1 甘草苷 白色针状晶体，mp：212～213％ FAB—MS m／z：419(M+1) ；IRvk~r (c1TI )：340( 2960，1650，1610，1510，1470，1290，1230，1090；L “(nm)：275，311(弱)； H．NMR(DMSO—d6，4( MHz)6：5．52(1H，d，J=12．4Hz，H一2 )，2．67(1I_ d，J=14Hz，H一3)，3．13(1H，dd，J=16．4，12．8H： H-3)，7．65(1H，d，J=8．4Hz，H一5)，6．51(1H，d，J 8．8Hz，H-6)，6．35(iH，d，J=2Hz，H一8)，7．44(1} d，J=8．4Hz，H-2；69，7．06(1H，d，J=8．4Hz，H一3 ，； C—NMR (DMSO—d ，100 MHz)6：78．56(C一2) 43．06(C一3)，189．82(C-4)，128．30(C-5)，110．4 ，C-6、1 3 r ．7、1n2 47 r ．8、l62 95 r 一91 113．43(C-10)，132．22(C-1 )，127．91(C一2 6 )， 116．03(C-3 5，)，157．34(C-4 )，100．15(C一1”)， 73．09(C-2”)，76．93(C-3”)，69．57(C4”)，76．49 (C-5”)，60．55(C-6”)。以上数据与文献报道 一致，鉴定为甘草苷(1iquiritin)
2．2．2 异甘草苷 黄色针状晶体，mp：148— 150~C，FAB．MS m／z：419(M+1) ；UV MeO“(nil1)： 240，260，332，360； H—NMR(CDC1 ，400 MHz)8： 7．85(1H，d，．，=15Hz)，7．85(1H，d， ：15Hz)， 7．82(1H，dd，J=8．8Hz，H-2，6)，7．17(1H，dd，J= 8．8 Hz，H-3，5)，6．39(1H，d，J：2．4Hz，H一3，)，6．49 (1H，dd，J=8．8，2．4Hz，H-5 )，8．14(1H，d，J= 9．2Hz，H-6 )，5．O7(1H，d，J：7．6Hz，H一1”)；”CNMR( CDC1 ，100 MHz)8：119．83(C．o【)，144．49(C一 8)，192．78(C=0)，129．81(C一1)，133．42(C．2， 6)，117．7(C-3，5)，160．76(C-4)，114．28(C一1，)， 166．02(C-23，103．61(C一3，)，167．05(C4，)，108．31 (C-5 )，131．32(C一6 )，101．47(C-1”)，74．43(C一 2”)，77．65(C一3”)，71．07(C4”)，77．85(C一5”)， 62．39(C-6”)。以上数据与文献报道_4 一致，鉴定为异甘草苷(isoliquiritin)。
2．3 纯度检查
2．3．1 对照品的杂质检查薄层色谱鉴别法分析：分别取适量甘草苷、异甘草苷，加甲醇制成2 mg／ml 的溶液，5 Ixl点样在硅胶GF 板上以氯仿：甲醇 (6：1)为展开剂，展开，晾开，用10％ 浓硫酸乙醇溶液显色，都为一个斑点。
高效液相色谱法分析：Hypersil ODS2(250 mm ×4．60 mm，5 txm)色谱柱；分别以甲醇_I)．1％ 冰醋酸水溶液(20：80)，甲醇-()．1％ 冰醋酸水溶液(40： 60)，甲醇-0．1％ 冰醋酸水溶液(60：40)为流动相测定；检测波长276 nm。结果表明，三种流动相下 对照品均为一个主峰。改变流相分析时未出现异常峰。
2．3．2 面积归一化法纯度检查 色谱条件：Hypersil ODS2(250 mm×4．6 mlTl，5 m)色谱柱，流动相为甲醇-0．1％ 冰醋酸溶液(40：60)，流速为1 ml· ra i n ～。检测波长为276 nm。对照品溶液浓度为 I．02 mg／ml，采集时间比保留时间延长1倍以上，面积归一化法计算，甘草苷和异甘草苷的纯度分别为： 99．9％ ，99．7％ 。
3 讨论
由于中药甘草中含有大量黄酮，故先采用大孔树脂分离出的黄酮。再作进一步分离，由于主要含有黄酮类等结构极为相似的杂质成分，所以分离难度很大，需要经过聚酰胺柱层析、凝胶柱层析、制备液相制备才能得到纯品。
分离制备的纯品经紫外光谱、红外光谱、质谱、核磁等波谱学方法分析，确定为甘草苷和异甘草苷。以面积归一化法检查其纯度大于98．O％ ，符合药典规定的标准物质的质量要求，可作为含量测定用 对照品。
甘草苷、异甘草苷为甘草中黄酮类成分的主要活性成分，该对照品的制备为甘草黄酮的新药开发提供了物质基础。
