OMEGA细菌基因组DNA提取试剂盒
试剂盒组成：
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| D1600-20 | D1600-50 | D1600-100次 |
| Rnase A | 400μl | 1ml | 2ml |
| 蛋白酶K | 400μl | 1ml | 2ml |
| 溶液A | 4ml | 10ml | 20ml |
| 溶液B | 4ml | 10ml | 20ml |
| 漂洗液 | 6ml | 15ml | 30.ml |
| 洗脱液 | 4ml | 10ml | 20ml |
| 吸附柱 | 20个 | 50个 | 100个 |
| 收集管 | 20个 | 50个 | 100个 |
| 说明书 | 1份 | 1份 | 1份 |
注：该试剂盒置于室温（15℃-25℃）干燥条件下可保存12个月，更长时间保存可置2℃-8℃
产品简介：
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和缓冲液系统提取细菌的基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有的材料，能够高效、专一吸附DNA，可大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提高的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。
使用本试剂盒提取的细菌基因组DNA可用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等试验。
操作步骤：
使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、 取细菌培养液1ml，12000rpm离心1min尽量吸尽上清。
2、 向细菌沉淀中加入200ul溶液A，振荡至菌体充分悬浮（如果仕革兰氏阳细菌，可在次步骤中加入终浓度为20mg/ml的溶菌酶），加入200ul 10mg/ml的RNase A37℃放置15-30min.
3、 向管中加入20ul 10mg/ml的蛋白酶K，充分混均，55℃消化30-60min，期间可颠倒离心管混均次数，直至样品消化完全为止。消化完全的标志是：液体清亮及粘稠。
4、 向管中加入200ul溶液B充分混均。如出现白色沉淀，可放75℃15-30min，沉淀既会消失，不影响后续实验。如溶液未变清亮，说明样品消化不，可能导致DNA量少及不纯，还有可能导致上柱后堵柱子。
5、 向管中加入200ul无水乙醇，充分混均，此时可能回出现絮状沉淀，不影响DNA的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中，静置2min
6、 12000rpm离心1min，废弃液，将吸附柱放入收集管中。
7、 向吸附柱中加入700ul漂洗液（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm离心1min废弃液，将吸附柱放入收集管中。
8、 向吸附柱中加入500ul漂洗液，12000rpm离心1min废弃液，将吸附柱放入收集管中。
9、 12000rpm离心2min，将吸附柱置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残留的漂洗液去除，否者漂洗液中的乙醇回影响后续的实验如酶切、PCR等
10、 将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加500-200ul经75℃水浴预热的洗脱液，室温放置5min，12000rpm离心1min。
11、 离心所得洗脱液再加入吸附柱中，室温放置2min，12000rpm离心2min即可得到高质量的细菌基因组DNA.
OMEGA细菌基因组DNA提取试剂盒注意事项：
1、 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
2、 若溶液A或溶液B中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解。
3、 如果样品消化不，后面的离心步骤中可能会出现堵柱子的情况，可适当延长离心时间。
4、 洗脱缓冲液的体积好不少于50ul，体积过小会影响回收效率；洗脱液的PH值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其PH值在8.0左右（可用NaOH将水的PH值调至此范围），PH值低于7.0会降低洗脱效率；DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。
5、 DNA浓度及纯度检测：得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD260处有显著收峰，OD260值为1相当于大约50ug/ml双链DNA、40ug/ml单链DNA。OD260/ OD280比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为PH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。 OMEGA细菌基因组DNA提取试剂盒
