视网膜毛细血管周细胞的分离和纯化是一个较为复杂的操作过程，以往多采用匀浆、逐级过滤、消化分离法，我们经过改进，用Ⅲ型胶原酶消化40min后，仅用120μm的尼龙筛过滤1次除杂。经鉴定，在周细胞分离、培养过程中既未发现内皮细胞的掺杂，也未见平滑肌细胞的生长。我们的建立了分离和培养视网膜毛细血管周细胞的有效方法。在周细胞的体外培养实验中获取纯净的周细胞是实验的关键所在。在PC细胞取材时，若操作不慎极易混进成纤维细胞、视网膜色素上皮细胞和其它杂细胞。成纤维细胞分裂增殖较快，少量成纤维细胞混入即可成为优势细胞，抑制周细胞的分裂增殖；若混入较多红细胞，分裂增殖快的红细胞也会影响周细胞的分裂增殖，甚至使周细胞全部死亡，使实验无法进行。要保证周细胞的纯度，应注重：牛眼取下后及时在750g/L酒精中浸泡2min，可使视网膜轻易剥脱，避免混入视网膜色素上皮细胞及成纤维细胞；剖开眼球的位置应在角巩膜缘后3mm处，视网膜将随玻璃体的脱出完整剥离；我们还发现，胶原酶消化时间越长，内皮细胞及平滑肌细胞等杂质细胞污染越多，周细胞活力越下降，因此，以4倍体积的胶原酶Ⅲ消化40~60min为宜。消化后一定要用120μm的尼龙筛过滤1次，以除去杂细胞和组织碎片。我们用庆大霉素代替Betadine对实验眼球进行消毒，效果良好，未发现毒副作用，而且庆大霉素较Betadine易得，价廉，为视网膜毛细血管周细胞的培养提供了极大的方便。
DMEM含有丰富的维生素、氨基酸，各种营养成分比例适当，适合细胞生长需要，而广泛应用于细胞培养。在配置DMEM培养液时应注重将pH值调至7.0±，微孔滤膜过滤后pH值将升高0.2～0.4，使培养液的终pH值为7.2～7.4。为保持pH值的稳定，在培养液中加入适量HEPES。原代培养宜选用胎牛血清，浓度为200ml/L，胎牛血清中含有促细胞贴壁的成分，有助于周细胞贴壁生长。在细胞已适应体外培养环境后，传代培养可选用小牛血清，浓度为100～200ml/L。
