摘 要: 构建了一个离线的二维高效液相色谱系统 以解决成分复杂的中药样品的分离和痕量组分的定量问
题。该系统在原有的单泵、单检测器高效液相色谱仪的基础上作了相应的改进而构成 样品先在维的Zor2
bax SB2C18色谱柱中进行分离之后 利用一个六通切换阀将目标组分切换并收集 浓缩后再注入第二维的Ai2
chrom Bond2AQ C18色谱柱中进行分离。利用上述方法对3种麻黄类生物碱进行了二维分离和分析 实验结果表
明 样品的分离明显改善 并且这个系统可用于中药的直接进样分析。
关键词: 二维高效液相色谱; 离线; 麻黄类生物碱
中图分类号: O657172 文献标识码: A 文章编号: 1004 - 4957 (2007) 01 - 0120 - 02
Analysis of Ephedrine Alkaloids in ChineseMedicine by 2D HPLC
ZOU Ping WANG Shao2yan ZHANG Zhi2qiang WU Xiu2hong
( School of Chemical Engineering University of Science and Technology L iaoning Anshan 114044 China)
Ab s tra c t: An off2line 2D HPLC was set up in the laboratory for separating and determining comp lex
components in traditional Chinese medicines. It is
d on a conventional HPLC system with one2
pump and one2detector. Column2switching technique was app lied to the system. The samp le was first
separated by passing through the column ( Zorbax SB2C18 ) of the first dimension of 2D HPLC. After elu2
ting the fraction of interestwas collected and concentrated. The concentrate was then injected into the
second column (Aichrom Bond2AQ C18 ) of the second dimension of 2D HPLC. This system has been
used to separate and determine the ephedrine alkaloids. Experimental results showed that the separation
of the alkaloidswas substantially imp roved.
Key wo rd s: Multidimensional high performance liquid chromatography; Off2line; Ephedrine alkaloids
多维高效液相色谱法(MD - HPLC)利用两根或多根性质不同的色谱柱对复杂样品中的待分析组分
进行分离。样品先在维色谱柱中进行预分离 然后将经过预分离的全部或部分组分选择性地转入
另一根或多根不同类型的色谱柱中进一步分离[ 1 - 4 ] 。多维高效液相色谱技术具有对样品进行预处理
分离富集的功能 可提高色谱系统的分离能力和选择性; 能从复杂的多种组分中排除干扰物质 有选
择性地针对感兴趣的组分进行分析。
作者利用离线的多维高效液相色谱技术 在原有的高效液相色谱仪器的基础上做了一些改进 组
建了一个离线的二维高效液相色谱系统。与常规的单柱分离相比 该技术具有更高的选择性、更大的
峰容量和更好的分辨率。该技术操作简单、快速 弥补了常规单柱色谱的不足 是一种具有发展潜力
的分离分析方法。本文就麻黄碱类化合物的分离对离线二维高效液相色谱法作一介绍[ 5 - 7 ] 。
1 实验部分
111 仪器与试剂
Agilent 1100系列高效液相色谱仪由脱气机、双元泵、自动进样器、柱温箱及二极管阵列检测器和
化学工作站组成。其中柱温箱中安装一六通切换阀、用于柱切换。
对照品: 麻黄碱、伪麻黄碱和甲基麻黄碱均购自药品生物制品所; 样品为郑州市协和制
药厂生产的小儿清热止咳口服液; 实验用水为娃哈哈纯净水 用0145 μm 的微孔过滤膜过滤;
收稿日期: 2006 - 04 - 05; 修回日期: 2006 - 05 - 03
基金项目: 辽宁省教育厅高等学校科学研究项目资助(202193400)
作者简介: 邹 萍(1967 - ) 女 安徽淮南人 副教授 硕士 Tel: E - mail: aszoup ing@hotmail1com
? 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
第1期邹 萍等: 多维高效液相色谱技术用于分析中药制剂中的麻黄类生物碱
KH2 PO4、H3 PO4、三乙胺为分析纯; 甲醇和乙腈为色谱纯。
113 色谱条件
一维的色谱条件是: 色谱柱为Zorbax SB2C18 (416 ×250 mm) 5μm 粒径; 缓冲溶液为20 mmol的
KH2 PO4 用H3 PO4 和三乙胺调pH值为217; 流动相为缓冲溶液- 甲醇(体积比90 ∶10) 流速为018
mL /min; 柱温为30 ℃; DAD检测器的检测波长为210 nm。
二维的色谱条件: 色谱柱为Aichrom Bond2AQ C18 ( 416 ×250 mm) 5 μm 粒径; 缓冲溶液为20
mmol /L的KH2 PO4 用H3 PO4 和三乙胺调pH值为217; 流动相为缓冲溶液- 乙腈(体积比97 ∶3) 流
速为018 mL /min; 柱温为30 ℃; DAD检测器的检测波长为210 nm。
2 结果与讨论
211 离线二维高效液相色谱原理
利用离线操作 将前一根色谱柱分离的馏分依次收集起来 浓缩后再注入第二根色谱柱进行分离。
利用一个六通切换阀改进后的离线多维高效液相色谱系统如图1所示。在这个系统中 样品先在
维色谱柱中进行分离(如图1a所示) 在维洗脱之后感兴趣的组分被切割 由刻度试管收集(如图
1b所示) 然后将一维色谱柱中不感兴趣
的组分洗脱走(如图1a所示) 。重复以上
操作共40次 并将容量瓶中所收集到的
组分用氮气吹干仪浓缩 然后再注入色谱
柱2 在柱2中将被捕集到的组分进一步
分离(如图1c所示) 。
212 常规的单柱分离
图2为使用Aichrom Bond2AQ C18柱对
小儿清热止咳口服液进行的单柱色谱分析
的色谱图。由于中药样品中所含物质成分
复杂 药物含量相差悬殊 使用常规的单
柱分离 对于低丰度有效成分的检测和定
量比较困难。
213 离线二维色谱
图3a为麻黄碱、伪麻黄碱和甲基麻
黄碱标样的一维色谱图; 3b为小儿清热
止咳口服液的一维色谱图。由图确定小儿
清热口服液样品在一维的切割时间为214
～218 min。
图3 标样及小儿清热止咳口服液的一维色谱图
Fig13 The first dimension chromatograms of the standard samp le
a. the standard samp le; b. the real samp le
图4a为麻黄碱、伪麻黄碱和甲基麻黄碱标样的二维色谱图; 4b为小儿清热止咳口服液的二维色谱
(下转第124页)
121
? 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
分析测试学报第26卷
参考文献:
[ 1 ] 药典委员会. 《人民药典》2005版二部[ S]. 北京: 化学工业出版社 附录Ⅷ P 54 - 57.
[ 2 ] 王昊阳 郭寅龙 张正行 等. 自动化静态顶空- 气相色谱- 质谱对天然香精中挥发性化学成分的快速分析[ J ].
分析测试学报 2004 23 (1) : 9 - 13.
[ 3 ] KOLB B ETTRE L S. Static Headspace - Gas Chromatography Theory and Practice [M ]. New York: Wiley - VCH
1997.
[ 4 ] MARCELLO C REMOM ANTON IO M P. Gas chromatographic - mass spectrometric analysis of residual solvent trapped
into illicit cocaine exhibits using head2space solid2phase microextraction[ J ]. J Chromatogr B 2002 772: 249 - 256.
[ 5 ] 李似姣. 影响顶空色谱分析因素的探讨[ J ]. 浙江师范大学学报 1999 22 (3) : 39 - 42.
[ 6 ] 刘兴平 张 良. 食用酒中甲醇气相色谱分析方法研究(二) ———顶空取样条件的研究[ J ]. 酿酒科技 2001
106 (4) : 79 - 81.
(上接第121页)
图。图中 峰1、2、3分别为麻黄碱、伪麻黄碱和甲基麻黄碱。由小儿清热止咳口服液的二维谱图可
见 由于去除了其它组分的干扰 麻黄碱、伪麻黄碱和甲基麻黄碱的信号明显增强 因此其定性与定
量的能力明显提高。
图4 标样及小儿清热止咳口服液的二维色谱图
Fig14 The second dimension chromatograms of the standard samp le and the real samp le
1. 麻黄碱( ephedrine E) ; 2. 伪麻黄碱(p seudoephedrine PE) ; 3. 甲基麻黄碱(methylephedrine ME)
参考文献:
[ 1 ] 厉 欣 陈学国 孔亮 等. 多维液相色谱及其在生命科学中的应用[ J ]. 生命科学 2003 15 (2) : 95 - 100.
[ 2 ] 刘照胜 李永民 蒋生祥 等. 多维高效液相色谱分离模式组合[ J ]. 色谱 1997 15 (6) : 490 - 493.
[ 3 ] 张文珠 张 虹 蒋生祥 等. HPLC柱切换技术在临床药物分析中的应用[ J ]. 分析测试技术与仪器 2002 8
(1) : 5 - 9.
[ 4 ] 王 静 许雪姣 于雁灵 等. 离线2D2LC - MS系统的建立及其用于人肝蛋白质组学的研究[ J ]. 高等学校化学
学报 2004 25 (12) : 2247 - 2249.
[ 5 ] 韩桂茹 赵志军 黄占群 等. 药材、制剂、半成品中麻黄碱、伪麻黄碱和苦杏仁苷的同时定量研究[ J ]. 中成
药 2005 27 (4) : 419 - 422.
[ 6 ] 丁明玉 温秀梅 马艳华. 高效液相色谱法测定麻黄浸膏粉中麻黄碱类生物碱[ J ]. 分析试验室 2004 23 (7) : 1
- 3.
[ 7 ] 谈 静 宋 英 盛 蓉. 高效液相色谱法测定咳喘口服液中麻黄碱的含量[ J ]. 时珍国医国药 2005 16 (5) :
375 - 376.
